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400-021-2021
產品介紹
人肺癌細胞A549/STR鑒定介紹
該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養建系，患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
一、人肺癌細胞A549/STR鑒定特性
1、來源：肺癌
2、形態：上皮細胞樣，多角形；貼壁生長
3、含量：>1x106
4、污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5、規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、運輸和保存
1、可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式：
?。?）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
?。?）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
?。?）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。
2、A549人肺癌細胞/STR鑒定/賽百慷（iCell）接受后的處理：
?。?）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
?。?）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
?。?）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml新的的*培養基。
?。?）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
?。?）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
細胞用途：僅供科研使用。
三、細胞培養操作規程，供參考
1、培養基及培養凍存條件準備：
?。?）準備F-12K培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
?。?）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
?。?）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
2、細胞處理：
?。?）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
?。?）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
四、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。
3、輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。
4、收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。
5、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
五、下面T25瓶為類；
1、細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2、4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
六、賽百慷（上海）生物技術股份有限公司主要產品和技術服務：
1、原代細胞服務
?。?）各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源；
?。?）多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
?。?）原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等；
?。?）原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務；
2、細胞株/系服務
?。?）細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書；
?。?）細胞系培養過程的技術指導；
?。?）細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等；
3、iPS細胞
?。?）iPS細胞基礎培養（有滋養層or無滋養層在）；
?。?）iPS細胞增殖及冷凍保存；
?。?）iPS基礎培養技術實習；
?。?）新藥及實驗儀器上市前評估；
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